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相色譜中流動相和固定相的選擇需結合分離目標（如樣品極性、化學性質）、色譜模式及分離要求（分辨率、分析速度等），核心原則是“匹配性”和“分離效率”。以下是具體選擇方法：

一、固定相的選擇

固定相的選擇是分離的基礎，主要依據樣品中組分的化學性質（極性、電荷、分子量等）和色譜模式：

1.根據分離模式選擇（核心）

?反相色譜（最常用）：

適用于分離非極性至中等極性的化合物（如多環芳烴、藥物、脂肪酸等）。

固定相選非極性鍵合相：優先C18（通用性強，疏水性最強，保留能力好）；若組分保留過強（出峰慢），可選C8（疏水性較弱）；分離芳香族化合物時，可選苯基鍵合相（增強π-π作用）。

?正相色譜：

適用于分離極性化合物（如醇、胺、糖、脂溶性維生素等）。

固定相選極性材料：硅膠（未鍵合，極性最強，靠吸附作用分離）；若需調節保留強度，可選氨基（-NH?）或氰基（-CN）鍵合相（極性中等，適用于中等極性化合物）。

?離子交換色譜：

適用于分離離子型化合物（如有機酸、氨基酸、金屬離子等）。

固定相選離子交換樹脂：陽離子化合物用陽離子交換劑（含磺酸基-SO??、羧基-COO?）；陰離子化合物用陰離子交換劑（含季銨基-N(CH?)??）。

?體積排阻色譜（凝膠色譜）：

適用于分離不同分子量的化合物（如蛋白質、聚合物）。

固定相選多孔凝膠：水溶性樣品用親水凝膠（如葡聚糖凝膠）；有機溶劑溶解的樣品用疏水凝膠（如聚苯乙烯凝膠），關鍵是凝膠孔徑需與樣品分子量匹配（小分子進入孔內保留久，大分子先流出）。

2.其他考慮：

?固定相顆粒大小（粒徑越小，柱效越高，但壓力越大）；

?柱長（長柱分離度高，短柱分析速度快）。

二、流動相的選擇

流動相需與固定相匹配，通過調節極性、離子強度、pH等，優化組分保留時間和分離度：

1.與固定相匹配（核心）

?反相色譜：

固定相非極性，流動相以極性溶劑為主（增強洗脫能力）。

基礎溶劑：水（或緩沖液，用于調節pH，抑制樣品解離）+ 有機溶劑（甲醇、乙腈為主，增加洗脫強度）。

調節原則：增加有機溶劑比例→流動相極性降低→組分保留時間縮短（洗脫加快）；若組分峰形差（如拖尾），可加緩沖液控制pH（如酸性樣品加甲酸/乙酸，堿性樣品加氨水）。

?正相色譜：

固定相極性，流動相以非極性溶劑為主（如正己烷、環己烷），加入少量極性溶劑（乙醇、乙酸乙酯）調節洗脫強度。

調節原則：增加極性溶劑比例→流動相極性升高→組分保留時間縮短。

?離子交換色譜：

流動相為水溶液，含離子型緩沖劑（如NaCl、KNO?）。

調節原則：增加離子強度→競爭吸附增強→組分保留時間縮短；調節pH可改變樣品離子化程度（如酸性樣品在低pH下更易離子化，保留更強）。

?體積排阻色譜：

流動相需與固定相溶脹性匹配（不破壞凝膠結構），且對樣品有良好溶解性（如蛋白質常用磷酸鹽緩沖液，聚合物常用四氫呋喃）。

2.其他要求：

?純度高（避免雜質干擾檢測）；

?與檢測器兼容（如紫外檢測器需流動相無紫外吸收，常用甲醇、乙腈，避免苯等）；

?低粘度（減少柱壓，如乙腈粘度低于甲醇，更常用）。

總結

選擇順序通常是：先根據樣品性質確定色譜模式→選對應固定相→再匹配流動相并優化比例/條件。核心是利用“固定相-流動相-樣品組分”的相互作用差異，實現高效分離。